Synthèse et caracterisation pharmacologique d'antagonistes du recepteur NK-2 des neurokinines

Abstract

Les tachykinines sont une famille de peptides qui partagent une séquence commune en C-terminal, Phe-X-Gly-Leu-Met-NHz. Les trois neurokinines identifiées chez les mammifères, notamment la Substance P (SP), la Neurokinine A (NKA) et la Neurokinine B (NKB), sont susceptibles à exercer un rôle de transmetteur dans le système nerveux central et périphérique. Les trois neurokinines exercent leurs effets via la stimulation de trois récepteurs différents; le récepteur NK-1, le récepteur NK-2 et le récepteur NK-3. Les trois neurokinines peuvent stimuler chacun des trois récepteurs et ceci avec un ordre de puissance différent. La présente étude est concentrée sur le récepteur NK-2 dont le ligand naturel est la NKA. Le développement d'antagonistes tel le R-396 et le MEN 10,396 a été crucial pour l'identification de sous-type de récepteur NK-2. Le R-396 et le MEN 10,396 montrent des affinités différentes sur deux préparations qui contiennent le récepteur NK-2: l'artère pulmonaire de lapin (APL: récepteur NK-2A) et la vessie de hamster (VH: récepteur NK-2B). L'objectif principal de la présente étude a été d'analyser à fond l'antagoniste R- 396 et essayer d'améliorer son affinité ou son profil pharmacologique. Le moyen d'y parvenir était d'effectuer une étude de structure-activité, c'est-à-dire que nous avons essayé par la synthèse et la purification d'une série importante d'analogues du R-396 d'analyser le rôle de chacun des six acides aminés qui le compose, afin d'identifier le résidu de choix pour chaque position. Tous les analogues ont été évalués sur quatres préparations pharmacologiques, notamment la veine cave de lapin (VCL: récepteur NK- 1), l'artère pulmonaire de lapin (APL: récepteur NK-2A), la vessie de hamster (VH: récepteur NK-2B) et la veine porte de rat (VPR: récepteur NK-3). Les meilleurs composés obtenus sont ceux qui ont été modifiés en position 1 et 6. Le R-639 [Tic1] et le R-709 [Nal1], qui ont été modifiés en position 1 par des acides aminés non-naturels, montrent des affinités supérieures à celles du R-396 sur la vessie de hamster. Ces analogues sont spécifiques, assez sélectifs et compétitifs sur le récepteur NK-2B. Un des composés modifié en position 6, le R-6()9 [Tic6] conserve une bonne affinité pour le récepteur NK-2B, un profil pharmacologique comparable à celui de R-396 lorsqu'évalué in vitro. Jusqu'à présent, les rapports existants dans la littérature indiquaient que la vessie de hamster était un système mixte NK-2 et NK-3. La nature unireceptorielle de la vessie de hamster a été établie pour la première fois dans la présente étude, et ceci à l'aide de nouveaux antagonistes synthétisés dans le cadre de cette étude, tel le R-639. Une autre série d'antagonistes du récepteur NK-2 contenant un lien pseudopeptidique a été synthétisée, purifiée et caractérisée. En insérant un lien pseudopeptidique réduit (CH2NH) entre la Leu9 et la Nle10 de l'agoniste sélectif NK-2 on obtient un composé [Leu9i?(CH2NH)Nle'°]NKA(4-10) qui se comporte comme un agoniste sur l'artère pulmonaire de lapin et comme un antagoniste sur la vesie de hamster. Ces différences représentent une autre preuve de l'existance de deux sous-types de récepteurs, le NK-2A sur lequel les pseudopeptides sont agonistes et le NK-2B sur lequel les pseudopeptides sont antagonistes.