Culture of dimethylhydrazine induced murine angiosarcoma and an evaluation of anti-angiogenic therapy of primary tumor and of tumor metastasis

Abstract

Ce mémoire comporte deux parties. La première se rapporte à l'étude de l'induction de la cancérogénèse par le diméthylhydrazine (DMH) et à la mise en culture des cellules endothéliales originant de ces tumeurs. La seconde partie se rapporte à la thérapie anti-angiogénique des tumeurs primaires et métastasiques. Partie 1: Cancérogénèse induite par le DMH et culture de cellules endothéliales d'origine tumorale. La recherche sur le traitement et l'étiologie du sarcome de Kaposi associé au SIDA (SK SIDA) a peu évolué jusqu'à maintenant à cause de l'absence d'un modèle animal satisfaisant. La tumeur humaine ne prolifère pas lorsque transplantée chez la souris nue et des tumeurs spontanées semblables au SK SIDA n'ont pas encore été identifiées chez les animaux. Pour cette raison, les efforts de recherche se concentrent sur l'induction et l'étude de tumeurs semblables au sarcome de Kaposi (SK) ainsi que sur l'isolation de lignées cellulaires. Dans le laboratoire du Dr. V.N. Nigam, il a été montré que le DMH induit des angiosarcomes (AS) dans la région rétropéritonéale chez la souris mâle C57Bl/6. Ceci était cohérent avec l'idée que le DMH est métabolisé principalement au niveau du foie et que le DMH activé, l'agent cancérigène, s'accumule dans la région rétropéritonéale. Le premier objectif de ce travail fut d' étudier les lésions précocement induites chez la souris et de comparer l'histologie et la croissance des AS avec les lésions précoces du SK telles que décrites dans la littérature. De façon surprenante, les lésions précoces associées aux AS ressemblaient aux lésions tardives de type KS. La deuxième objectif fut de transplanter des tumeurs AS primaires chez les souris nues et syngéniques C57Bl/6. Nous avons observé une réponse angiogénique même en absence de croissance tumorale. Chez les deux souches, les transplants AS furent rejetés. Le troisième objectif de ce projet fut de développer une lignée cellulaire provenant de tumeurs AS primaires induites par le DMH. Plusieurs promoteurs de croissance et techniques de culture furent testés. Nous avons constaté que la technique de culture d'explants et une combinaison de DMEM et HAM F-12 (1:1) contenant 10% FBS et 48 μg/ml de garamycine furent les conditions les plus avantageuses. La lignée cellulaire AS (désignée NAIK AS) résultante avait plusieurs caractéristiques communes avec les lignées cellulaires SK SIDA dont le taux de croissance. Cependant, leurs besoins nutritionnels différaient. La survie à long terme des lignées SK requirent l'addition de facteurs de croissance ou l'utilisation de milieux conditionnés. Les deux lignées cellulaires présentaient des morphologies similaires et des patrons de localisation comparables pour l'agglutinine 1 de Ulexeuropaeus et l'antigène relié au facteur VIII. Elles ont aussi démontré leur incapacité à former des tumeurs lorsqu'injectées chez la souris. Considérant les similarités évidentes entre ces lignées et les caractéristiques de culture de la lignée NAIK AS, cette dernière peut être considérée comme l'équivalent murin des lignées SK SIDA A la différence des cellules SK SIDA, la lignée NAIK AS exhibe une durée de survie relativement longue et croît bien sous des conditions de culture défavorables.