Effets de l'ACTH et de l'angiotensine II sur le calcium intracellulaire dans des cellules glomérulées de surrénales de rat et de bœuf en culture

Abstract

L'objectif initial de ce travail fut d'étudier et de comparer les changements dans les concentrations intracellulaires de calcium dans des cellules glomérulées de rat et de boeuf en culture, lors d'une stimulation avec soit l’angiotensine II, soit le potassium ou l'ACTH. Dans cette étude, nous avons effectué nos mesures de calcium intracellulaire ([Ca2+]i) à l'aide d'un marqueur fluorescent et spécifique au calcium, le Fura-2. L'utilisation de cet indicateur, combiné avec la microspectrofluorométrie et la technique d'imagerie, nous a permis d'analyser les variations de la [Ca2+]i sur des cellules individuelles ou groupe de cellules. Les mesures effectuées avec la microspectrofluorométrie ont montré que le potassium, l’angiotensine II ainsi que l'ACTH augmentent la [Ca2+]i via des mécanismes différents. Premièrement, le potassium induit une augmentation immédiate de [Ca2+]i, tel qu'il avait été démontré antérieurement. Deuxièmement, l’angiotensine II induit une réponse biphasique caractérisée par: 1) une augmentation rapide et transitoire de [Ca2+]i. 2) une phase de plateau soutenue de [Ca2+]i qui provient d’un influx de Ca2+ via des canaux calciques dépendant du voltage. Enfin nous avons démontré que l'ACTH induit une augmentation de [Ca2+]i dans des cellules glomérulées. Le profil d'augmentation de [Ca2+]i provoqué par l'ACTH peut être divisé en deux phases: 1) un temps de latence d’environ 10 à 15 min avant que l’on puisse voir apparaître l'augmentation de [Ca2+]i. 2) la seconde est l’augmentation lente et progressive de [Ca2+]i qui est le résultat d'un influx de calcium via des canaux calciques. De plus, en absence de calcium externe, aucune augmentation de [Ca2+]i n'a été observée suite à une stimulation à l'ACTH. L'utilisation de la technique d'imagerie nous a permis d'examiner la distribution spatiale des changements de [Ca2+]i dans un groupe de cellules. La capacité d'enregistrer des images d’un petit nombre de cellules confirme l'hétérogénéité des réponses cellulaires, et corrobore les résultats obtenus par la microspectrofluorométrie. Dans ce travail, nous avons fait des études sur les effets de fragments de l'ACTH, l'ACTH1-10 et l'ACTH11-24, sur la sécrétion de stéroïdes et la production d'AMPc. Les résultats obtenus démontrent que ceux-ci stimulent la sécrétion de stéroïdes mais à des doses très élevées. La présence simultanée des deux fragments n'a pas recouvré l'effet de la molécule entière. Aucun des fragments, seuls ou combinés, n'a stimulé la production d'AMPc. Ceci suggère que l'intégrité moléculaire de l'ACTH est essentielle pour l'obtention d'une stimulation et d'une production de stéroïdes et d'AMPc, respectivement. A l'aide de la microspectrofluorométrie et de l'imagerie, nous avons montré pour la première fois que l'ACTH augmente la [Ca2+]i via des canaux calciques. L'AMPc et les PKA ont un rôle primordial à jouer lors de cette augmentation.