Le récepteur surrénalien de l'ACTH : nouveaux outils pour son marquage par photoaffinité, son isolement et sa caractérisation

Abstract

Bien que l'existence du récepteur surrénalien de l’hormone adrénocorticotrope ait été mise en évidence il y a près de vingt ans (LEFKOWITZ, ROTH et PASTAN, 1970), et malgré les nombreuses études publiées depuis sur le sujet, un consensus concernant les caractéristiques de ce récepteur, ainsi que le nombre de sites de liaison de l'ACTH retrouvé au niveau des glandes surrénales se fait toujours attendre. Afin d'en arriver à réaliser une caractérisation du récepteur surrénalien de l'ACTH, la plupart des études effectuées par diverses équipes de chercheurs ont utilisé une technique qui a démontré son efficacité lors d'études de caractérisation de différents récepteurs: le marquage par photoaffinité. Lors de la présente étude, nous avons étudié les propriétés stéroïdogéniques des peptides suivants, analogues de l'ACTH et dérivés de celle-ci, ou plus précisément du Phe2 Nle4 ACTH 1-24: 1) Phe2 Nle4 Gln5 ACTH 1-24 2) (4' N02)Phe2 Nle4 ACTH 1-24 3) Phe2 Nle4 (4' N02)Phe7 ACTH 1-24 4) Phe2 Nle4 (4' N02)BzlLys11 ACTH 1-24 5) Phe2 Nle4 (4' N02)BzlLys16 ACTH 1-24 Les séquences furent construites selon la méthode en phase solide, sur résine Merrifield. Les peptides furent convertis en analogues photosensibles par halogénation, diazotation et formation d'azide en vue d'être éventuellement utilisés en tant qu'outils lors du marquage par photoaffinité du récepteur surrénalien de l'ACTH. Une étude des propriétés stéroïdogéniques de ces peptides a démontré que le (4' N3)Phe2 Nle4 ACTH 1-24 est l'analogue le plus susceptible de donner des résultats intéressants. Une caractérisation du récepteur surrénalien de l'ACTH à l'aide d'un réactif hétérobifonctionnel, le SASD, a permis de déterminer, chez le boeuf, en milieu réducteur, la présence de quatre protéines, de masse moléculaire de 98, 68,5, 63 et 45 kilodaltons, qui ont reconnu le complexe ACTH-SASD de façon spécifique. Chez le rat, en milieu réducteur, quatre protéines semblables ont aussi été retrouvées, d'une masse moléculaire respective de 102,5, 63,5, 60,5 et 48 kilodaltons, au niveau de la zone glomérulée. Au niveau de la zone fasciculée, seules deux bandes de protéines ont été retrouvées, d'une masse moléculaire respective de 55 et 52,5 kilodaltons. La présence de deux types de sites de liaison a par ailleurs été démontrée. Au niveau de la zone glomérulée, nous avons observé un site de haute affinité (Kd= 2,80 x 10-10 M) et un site de faible affinité (Kd= 2,07 x 10-8 M). Au niveau de la zone fasciculée, ces deux types de sites ont des Kd respectifs de 7,10 X 10-11 M et de 1,80 X 10-8 M.