Étude en culture organotypique de la différenciation des cryptes duodénales chez la souris fœtale

Abstract

Chez la souris, les cryptes intestinales ne se différencient que dans les jours suivants la naissance alors que les villosités sont déjà formées. Nous avons démontré dans ce travail que des extraits de liquide amniotique de rat et de certains organes prélevés chez le rat adulte contiennent un facteur capable d'influencer la différenciation des cryptes (CDF) après 48 heures de culture dans l'intestin de souris foetales de 15 jours avec le milieu T8. Le besoin de quantifier cette activité CDF a mené à l'élaboration d'un essai biologique axé sur la culture organotypique. La quantification a été basée sur le taux de réponse pour une expérience multiplié par le nombre de cryptes dans chaque explant ayant répondu, (la réponse d'un explant étant définie comme la présence d'au moins une crypte sur la coupe examinée); la moyenne donnant l'indice cryptal (IC). A l'aide de cet essai biologique nous avons constaté que le CDF a des propriétés physico-chimiques lui conférant une grande stabilité. Nous avons constaté aussi qu'il était possible de purifier ce facteur et d'en déterminer le poids moléculaire par filtration sur gel. Nous l'avons estimé à environ 13,000 daltons. L'histologie et l'autoradiographie nous ont appris que le CDF permettait la différenciation des cryptes sans exiger la présence de villosité et qu'il permettait de confiner l'activité de synthèse d'ADN aux cryptes précocément formées. Du point de vue physiologique le CDF semble avoir un effet régulateur sur le transport des électrolytes puisque les explants cultivés avec un milieu T8 contenant du CDF et un supplément de NaCl présentaient une muqueuse avec un épithélium et un mésenchyme normal tandis que sans CDF, l'épithélium devenait cubique et le mésenchyme montrait une forte tendance à régresser. L'effet sur la phosphatase alcaline milite aussi en faveur d'un rôle physiologique. L'exploration d'autres organes chez le foetus et l'adulte montre que l'origine présomptive pourrait être la membrane vitelline viscérale (MV) et que cette activité peut être démontrée dans la MV de plusieurs espèces soit le rat, la souris et le sac vitellin humain. Les cellules atypiques qui se retrouvent dans certains explants cultivés en présence de CDF et apparentées morphologiquement aux cellules intermédiaires chez l'adulte apparaissent comme un type cellulaire à part, en se basant sur les propriétés des cellules intermédiaires de l'adulte. Ces cellules pourraient être impliquées dans la formation des cryptes. En conclusion, nous avons démontré, par la culture organotypique de l'intestin de souris foetale, que la formation des cryptes n'est pas reliée à la formation des villosités. Il s'agit donc de deux processus morphogénétiques indépendants. Nous avons démontré aussi que certaines cellules localisées dans la crypte et appelées cellules intermédiaires, constituent un type cellulaire épithélial distinct.